WT1肿瘤疫苗

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Wilms肿瘤基因WT1在白血病和各种实体瘤中高度表达，在这些疾病中发挥了致癌基因的作用，在白血病和固体癌的发病和发展中发挥着重要的作用。自2007年以来，尤其是对于白血病，日本作为监测肿瘤负担的标志已将其纳入保险范围。另外，从WT1基因（肽）翻译的一部分蛋白质与MHC I类分子一起在癌细胞的细胞表面表达，并且该肽用于疫苗疗法以攻击MHC I类分子-肽复合物。已经揭示出，可以在多种癌症类型中诱导细胞毒性T细胞，并且公认抗肿瘤作用。

　　1、WT1基因是什么

　　WT 1基因是在1990年发现的小儿肾肿瘤威廉姆斯肿瘤的原因基因。WT1基因被鉴定为肿瘤抑制基因，因为在Wilms肿瘤的一部分中观察到该基因的缺失或突变，在Wilms肿瘤由来的细胞株中导入正常的WT 1基因后，细胞增殖被抑制，因此WT1基因被认为是抑制癌症的基因。

　　在我们（注：大阪大学）的实验室中，关于以前被认为是肿瘤抑制基因的WT1基因，野生型WT1基因在各种实体恶性肿瘤中过表达，例如白血病，肺癌，结肠癌，胰腺癌，骨和软组织肉瘤以及恶性神经胶质瘤。已经阐明它被表达并起癌基因而不是抑癌基因的作用。

　　2、WT1-mRNA作为白血病和骨髓增生异常综合症的标志物

　　在我们（大阪大学）的实验室中，我们还建立了可定量测量WT1测定方法（WT1 mRNA的定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR））。使用此WT1检测方法定量分析急性骨髓性白血病（AML），急性淋巴细胞性白血病（ALL），急性混合性白血病（AMLL），慢性骨髓性白血病（CML）和非霍奇金淋巴瘤中的WT1-mRNA，结果，在所有白血病中，观察到WT1基因的高表达，其比正常骨髓细胞高约1000倍，比正常外周血细胞高约100,000倍。在慢性骨髓性白血病（CML）中，随着疾病阶段发展到慢性，过渡性和胚芽危机，WT1表达水平增加了约10倍。另一方面，在非霍奇金淋巴瘤中，肿瘤细胞中的WT1表达水平从白血病水平变化到低水平，并且在大约一半的病例中未检测到WT1表达。




　　通过这种WT1检测，可以检测出白血病细胞，其灵敏度为1,000到10,000个正常骨髓细胞中的1个和100,000个正常外周血细胞中的1个。因此，它对于检测白血病中的最小残留疾病很有用，并且自2007年11月1日以来，它已成为保险范围内的一项临床测试，作为对急性骨髓性白血病的治疗监测测试。

　　另一方面，骨髓增生异常综合症（MDS）易受贫血和白血球减少症的感染，这是由于红细胞，白血球和多谱系血小板的异常产生引起的贫血和白血球减少，以及由于血小板计数减少而引起的出血倾向。这是一种疾病。此外，MDS中有20％到30％转化为白血病，这被认为是白血病前状态。定量该骨髓增生异常综合征（MDS）中WT1 mRNA的表达水平后，WT1 mRNA的水平在患有白血病高转移风险的人群中较高，这与向白血病的过渡有关。基于这些结果，自2011年8月1日起，WT1分析也已成为保险所涵盖的一项临床测试，作为MDS的诊断辅助工具和监测进展的标志物。

　　3、WT1肽疫苗癌症免疫研究历史

　　我们开发了以WT 1为目标的肽疫苗癌免疫疗法。肽疫苗癌免疫疗法是使用作为癌症预防法确立的“疫苗”技术，诱导攻击癌细胞的T淋巴球（细胞伤害性T淋巴球，CTL）的治疗法的总称。作为给药的方法，分为肽疫苗疗法、树状细胞疫苗疗法，给药方法分为肽疫苗治疗和树突状细胞疫苗治疗，所使用的癌抗原是使用癌抗原（蛋白质）全长蛋白质的方法，或仅使用癌抗原肽片段的单个表位的方法（有多种方法，例如短肽），包含多个表位的蛋白的部分片段（长肽）和短肽的组合，。关于这个肽疫苗疗法的详细内容，请参照治疗的概要。，请参阅治疗大纲。

　　关于WT1肽疫苗癌症免疫疗法的研究历史，最早在2000年发表的论文中表明了WT1对肿瘤细胞的细胞障碍性T细胞（以下称为WT1特异性CTL）的诱导抗原外延对HLA-A*0201病例的认定。2000年，针对HLA-A*2402病例发表了WT 1-235肽鉴定论文。在2003年，我们报道了世界上第一种使用WT1-235肽的癌症疫苗疗法的人体临床试验结果，显示出WT1肽疫苗疗法作为一种治疗方法的潜力。基于这一成功，在我们的实验室中，已经开发了针对急性骨髓性白血病，骨髓增生异常综合症，成胶质细胞瘤，胰腺癌和罕见癌症的WT1肽疫苗疗法的临床试验，这些疗法已被证实有效治疗。关于个别临床试验结果的以往成就请参考。

　　根据我们实验室的报告，针对WT1的癌症疫苗疗法也显示出了令人鼓舞的结果，2009年美国国家癌症研究所的75种癌症抗原来自海外，1）治疗效果，2）免疫原性，3）特异性，4）致癌性，5）表达水平和阳性率，6）在癌干细胞中表达，7）抗原阳性患者数量，8）表位数量，9）抗原表达位点WT1蛋白在9个项目的评分排名中，WT 1蛋白在“期待的癌症抗原排行榜”中排名第一（Cheever et al.Clin Cancer Res 2009）。


　　4、WT1肽疫苗癌症原理


　　1、HLA class I-restricted peptides are injected intradermally or subcutaneously along with some immune adjuvant.Peptides bind to the HLA class I molecules on the surface of DCs,or are taken up and presented on the cell surface along with HLA class I molecules by immature DCs.Immune adjuvant injected at the same time stimulates immature DCsin peripheral tissues。

　　HLA I类限制性肽与一些免疫佐剂一起皮内或皮下注射。肽与树突细胞表面上的HLA I类分子结合，或被未成熟树突细胞吸收并与HLA I类分子一起呈递在细胞表面上。同时注射的免疫佐剂刺激未成熟的DCsin外周组织

　　2、These activated DCsmigrate via lymphatics to regional lymph nodes,where they arrive as fully mature DCsthat express both antigen/HLA-molecule complexes and costimulatory molecules necessary to stimulate antigen-specifi c T-lymphocytes.

　　这些活化的树突细胞通过淋巴管转移至区域淋巴结，在那里它们作为完全成熟的树突细胞到达，其表达抗原/HLA-分子复合物和刺激抗原特异性T-淋巴细胞所必需的共刺激分子。

　　3、Antigen-specifi c T-lymphocytes,especially CD8+cytotoxic T-lymphocytes(CTLs),are stimulated to proliferate and differentiate by mature DCsand form a clone of effecter cells.

　　抗原特异性T淋巴细胞，尤其是CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）被成熟DC刺激增殖和分化，并形成有效细胞的克隆。

　　4、Ultimately,antigen-specifi c CTL senter the tumor bed,and kill the targeted cancer cells by inducing apoptosis and releasing specialized cytotoxic granules,such as perforin and granzymes,upon recognition of the antigen on the surfaces of tumor cells.

　　最终，抗原特异性CTL引发肿瘤床，并且在识别肿瘤细胞表面上的抗原后，通过诱导细胞凋亡并释放特异性细胞毒性颗粒（例如穿孔素和颗粒酶）来杀死靶向癌细胞

　　5、WT1肽疫苗注射方式

　　WT1疫苗通常通过前往门诊诊所进行接种。注射皮肤疫苗后会发红和肿胀。

　　下图是接受过数十次疫苗注射的患者注射部位的照片。个体之间的发红程度差异很大，但几乎所有接种疫苗的人都可以识别。颜色通常会随着时间而褪色。

　　

　　接种部位（上肩）

　　

　　数周之后的接种部位（上肩）

　　6、WT1疫苗接种中心

　　香港海港城疫苗中心 预约QQ 276900501